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| Cómo cuantificar la infección por nosema este entrenamiento es ofrecido por el programa de abejas melíferas y polinizadoras de Washington State University Tenga en cuenta que esta es una de las muchas maneras de cuantificar las esporas de nosema para cuantificar la infección por nosema en sus abejas melíferas necesitará un microscopio compuesto. | Text reads, Cómo cuantificar la infección por Nosema. Presentado por al Programa de Abejas y Polinizadores de WSU. |
| Este es un dibujo del microscopio compuesto con algunos términos que escuchará a lo largo de esta presentació. Necesitará una muestra de abejas conservadas en alcohol. | Texto en pantalla. Microscopio compuesto. Las diferentes partes del microscopio están etiquetadas. Ocular. Revolver. Lente Objetivo. Pinza de la platina. Platina. Enfoque grueso. Enfoque fino. Controles de la platina. Arte del microscopio por biorender punto com. A continuación, en un laboratorio. La narradora muestra los materiales a medida que los menciona. |
| Puedes triturar las abejas enteras en una bolsa Ziploc usando un rodillo. Alternativamente, si deseas separar los abdómenes de las abejas para obtener una muestra más limpia, puedes cortar los abdómenes usando un plato de papel, tijeras y pinzas. Recomendamos usar un contador manual para llevar el registro de cuántas abejas o abdómenes has tomado de tu vaso de muestra. | Una persona investigadora usando guantes en un laboratorio. |
| Esta capacitación te mostrará una comparación directa entre usar abejas enteras y abdómenes. Al final del video se te mostrará lo que verías bajo el microscopio usando abejas enteras o solo abdómenes, y luego podrás decidir qué prefieres usar cuando cuentes Nosema en tus abejas. En esta capacitación, estamos usando 50 abejas. | El texto dice, nota al margen. Abejas enteras, solo abdómenes. ¿Qué debo hacer? |
| Transfiere 50 abejas enteras a una bolsa Ziploc. O si estás separando los abdómenes, toma 50 abejas del vaso de muestra y colócalas en el plato de papel. Puedes aislar el abdomen de las abejas sujetando el tórax con las pinzas y usando tijeras para separar el abdomen de la abeja. | Vista comparativa del proceso para abejas enteras y solo abdómenes. La persona investigadora usa el contador mientras coloca las abejas enteras en una bolsa Ziploc y separa las abejas en un plato de papel. |
| Recomiendo mantenerlos en montones separados mientras separas los abdómenes. Una vez que hayas recolectado los 50 abdómenes de las abejas, puedes transferirlos a la bolsa Ziploc. | Ella separa los abdómenes de las abejas. |
| Para cuantificar Nosema, debes agregar 1 mililitro de agua por cada abeja o abdomen. En este caso usamos 50 abejas o 50 abdómenes. Usaremos un cilindro graduado y mediremos 50 mililitros de agua. | Ella coloca los abdómenes en una bolsa Ziploc. |
| Transfiere los 50 mililitros de agua a la bolsa y luego ciérrala bien, tratando de eliminar el exceso de aire. Ahora es momento de triturar las muestras de abejas usando un rodillo; puedes mover la bolsa a diferentes posiciones para rodar sin que se rompa. | Ella vierte 50 mililitros en el cilindro graduado y luego el agua en las bolsas Ziploc. |
| Tritura toda la muestra. [Música] | Ella usa el rodillo para triturar las abejas y los abdómenes, volviendo el agua amarilla. El agua de los abdómenes es de un amarillo más brillante. |
| En esta capacitación, estamos usando hemocitómetros desechables, en este caso un hemocitómetro C-chip. El hemocitómetro desechable permite cargar dos muestras diferentes. Esta forma de media luna en cada lado es el área donde cargarás tu muestra. | Ella muestra el empaque del hemocitómetro. |
| Asegura cuidadosamente el hemocitómetro desechable en la platina con la pinza. Usando el enfoque grueso, localiza el hemocitómetro en tu campo de visión. Usa los controles de la platina para ajustar los campos X y Y, moviéndolos hacia adelante y atrás. | Ella coloca el hemocitómetro en la platina del microscopio con objetivo de 4x. 40 aumentos. |
| Así se verá tu hemocitómetro con el objetivo 4X o aumento 40X. Una vez que tu campo de visión esté claro, puedes ajustar a 100X o al objetivo 10X. | Imagen ampliada del hemocitómetro con patrón de cuadrícula. |
| Usa solo el tornillo de enfoque fino. Ajusta tu campo de visión para que el hemocitómetro esté claro. Debería verse algo así. | Imagen súper ampliada del hemocitómetro con patrón de cuadrícula más pequeño. |
| Retira cuidadosamente el hemocitómetro de la platina. Carga tu muestra. Mezcla un poco más el contenido de la bolsa antes de pipetear. | Ella agita un poco la bolsa antes de usar la pipeta para cargar la mezcla en la cámara. |
| Solo necesitas una cantidad muy pequeña en la cámara, menos que una gota. Una vez que la cámara esté llena, estás listo para observar Nosema. Colócala de nuevo en la platina. Usando el enfoque fino, vuelve a enfocar para encontrar las líneas de cuadrícula. Luego muévelo lentamente hasta el aumento 400X. O con el objetivo 40X usa solo los tornillos de enfoque fino. Evita que tu muestra toque la lente del objetivo. Tus líneas de cuadrícula se verán así. | Ella ajusta el enfoque fino mientras observa por el microscopio. |
| Esta imagen en la parte superior izquierda muestra cómo se ve la cuadrícula del hemocitómetro. El objetivo es ampliar esta sección central que contiene 25 cuadros para cuantificar las esporas de Nosema. | Imagen aún más ampliada del hemocitómetro con más líneas de cuadrícula. |
| Solo contarás cinco de estos cuadros más pequeños: cada una de las cuatro esquinas y el cuadro central. Se recomienda seguir una forma serpentina. Esto te ayuda a llevar el control mientras cuentas las esporas de Nosema. | Diagramas de los patrones de cuadrícula en el hemocitómetro. Dentro de la sección central hay más líneas que crean cuadros. En una versión ampliada de la sección central, el cuadro superior izquierdo está numerado 1. El superior derecho, 2. El cuadro central, 3. El inferior izquierdo, 4. Y el inferior derecho, 5. |
| En cada uno de los cuadros que contarás, hay 16 cuadros más pequeños. Recomendamos mover la vista en forma serpentina de derecha a izquierda para llevar el control de las esporas ya contadas. Para mantener la consistencia, no cuentes las esporas dentro de las tres líneas fuera de los cuadros pequeños. Usa los controles de la platina para moverla hacia adelante y atrás siguiendo esa forma serpentina. | Un diagrama con esporas en todo el cuadro y una flecha en forma serpentina. Otro diagrama con esporas en las líneas que marcan el borde de los cuadros, cada una de esas esporas está tachada. |
| Recomendamos usar un contador manual para llevar el registro de las esporas mientras las cuentas. Suma el número de esporas en cada uno de estos 5 cuadros resaltados. Cuando termines de contar las esporas en esos cinco cuadros, gira la pieza del objetivo. Regresa al objetivo 4X. Luego retira cuidadosamente el hemocitómetro de la platina. | La persona investigadora usa el contador para contar las esporas mientras ajusta los controles de la platina para mover los campos X y Y. |
| En la punta de esta flecha negra, aquí hay una espora de Nosema. Son increíblemente pequeñas; al acercar más, puedes ver que tienen forma similar a un caramelo Tic Tac. Tienen un contorno definido, son ovaladas y tienen bordes lisos. Puedes usar esta fórmula para calcular el número de esporas por abeja y hacer inferencias sobre el nivel de infección en tus colonias. Toma el número total de esporas que contaste en esos cinco cuadros y multiplícalo por 50,000 como ejemplo. Después de contar mis 5 cuadros, mi suma fue 31, así que multiplico 31 esporas por 50,000. Eso es aproximadamente 1.5 millones por abeja. | Una muestra con una espora. |
| Para comparar el uso de abejas enteras frente a solo abdómenes, aquí hay una representación visual de lo que podrías ver en tu campo de visión del microscopio. Esta vista es con aumento 40X. Puedes ver que hay restos en ambas muestras. Al acercar más con aumento 100X, puedes ver que el campo de visión está mucho más lleno de restos en la muestra de abeja entera. Puedes encontrar muchas más piezas de alas, antenas y patas. | Comparación lado a lado de una muestra de abejas enteras y una muestra de solo abdómenes con objetivo 4X, aumento 40X. |
| Este es el campo de visión que verás cuando cuentes Nosema en la muestra de abeja entera. Hay bastantes más restos en comparación con el abdomen. Solo aquí, en la parte derecha, rodeada por el cursor, hay una espora de Nosema, que podría pasar desapercibida o quedar oculta bajo algunos restos en las muestras de abeja entera. | Muestras con objetivo 40X. Aumento 400X. |
| [reproducción de música] | Texto, para preguntas o comentarios sobre esta capacitación educativa, envíe un correo electrónico a nuestro programa en entomology dot bees at W S U dot E D U. |